כאן, יש ליצור sCRAM (המוטיב הסמוך של protospacer suboptimal (PAM) -מתווך CRISPR RNA ו-Cas12a nuclease בשילוב עם הגברה מהירה איזותרמית מולטי-אנזים), פלטפורמת אבחון מהירה- וחינמית שמזהה ASFV תוך 20 דקות. sCRAM משלב שלב שחרור מהיר של חומצת גרעין (40 מעלות, 5 דקות) עם תגובת-שפופרת אחת המשלבת הגברה איזותרמית מולטי-אנזים (MIRA) ו-PAM-מתווך CRISPR/
מערכת Cas12a (37 מעלות, 15 דקות), המאפשרת -קריאה חזותית בחינם של מכשירים באמצעות אור UV או פסי זרימה לרוחב (LFS). sCRAM מדגימה רגישות לזיהוי-עותקים בודדים ואינה מציגה תגובתיות- צולבת עם חמישה פתוגנים נפוצים של חזירים (PRRSV, PPV, PRV, PCV, PCV). ההערכה של 111 דגימות סימולציות וקליניות (כולל דם, פלזמה וספוגיות) גילתה התאמה של 100% עם qPCR עבור קריאת UV ו-98.20% עבור LFS
קריאה, כאשר שתי השיטות מציגות 100% ספציפיות. הפשטות, המהירות וההתאמה לשטח של sCRAM מדגישים את הפוטנציאל שלו למעקב מבוזר של ASFV בהגדרות מוגבלות-במשאבים, ומציעים כלי רב עוצמה לבלימת התפרצות.
במחקר זה, פיתחנו sCRAM, פלטפורמת זיהוי ASFV מהירה-ניתנת לפריסה המשלבת PAM-מתווכת CRISPR/Cas12a עם הגברה איזותרמית מולטי-אנזים. המבחן משיג רגישות-לעותק 1 עותק אחד/uL תוך 20 דקות ואינו מראה תגובתיות-תצלבת עם פתוגנים חזירים עיקריים. אימות קליני על פני דגימות דם, פלזמה וספוגיות הדגים התאמה מלאה ל-qPCR באמצעות קריאת אור UV ודיוק של 98.20% באמצעות רצועות זרימה לרוחב. עם תפעול פשוט, רגישות וספציפיות גבוהות ופרשנות תוצאות חזותיות, sCRAM מציע פוטנציאל חזק ל-מעקב אחר ASFV באתר ויישומי אבחון של-נקודה רחבה יותר-של-טיפול.
