מערכת ה-RPA-CRISPR/Cas12a במחקר זה משיגה זיהוי מהיר (30-40 דקות), רגיש במיוחד (1 עותק/μL) של HCMV על ידי מיקוד לגן UL123 המוקדם-שבא לידי ביטוי, תוך ביצועים טובים יותר מהשיטות הקונבנציונליות בבדיקות דגימות קליניות. חדשנות זו של זיהום{0}מאפשר{0}אבחון{0}נמוך בזמן{1} במיוחד בחולים עם דכאות חיסונית, ומדגיש את ההיתכנות של אבחון מבוסס CRISPR- לשיפור הניהול של מחלות הקשורות ל-HCMV-. הפשטות והיעילות של המבחן מדגישים את הפוטנציאל שלו ככלי-של-טיפול עבור הגדרות מוגבלות במשאבים-.
תבניות של אתרי הגברה RPA ובחירת ערכה.
(א) עיצוב פריימר RPA לגבי מיקום שברי הגברה. החצים מציינים את עמדות הבסיס מההתחלה ועד הסוף של הפרגמנט המוגבר עם הפריימרים P1-P6.
(ב) תמונת אלקטרופורזה של ג'ל agarose של המוצר RPA מוגבר עם 6 ערכות פריימר של HCMV.
(ג) בדיקת יעילות ההגברה של ערכות RPA מחברות שונות. P: פריימר, NC: בקרה שלילית.
התוצאות הצביעו על כך שערכת AmpFuture הציגה את יעילות ההגברה הגבוהה ביותר.
השוואה בין שיעורים חיוביים של MIRA-CRISPR/Cas12a, PCR - Fluorescent Probe Method ו-qPCR בדגימות קליניות.
אספנו דגימות דם ושתן מ-48 חולים קליניים. DNA גנומי הופץ מדגימות אלה באמצעות ערכת TIANamp Genomic DNA, ותוצאות זיהוי UL122 נותחו באמצעות שיטת ה-PCR- בדיקה פלורסנטית. בהשוואת התוצאות שלנו לאבחנות קליניות, השיטות שלנו זיהו 6 דגימות חיוביות שהיו שליליות בבדיקות קליניות.
