Staphylococcus haemolyticus הוא חיידק שלילי קואזולאז-גרם שכיח מאוד בבתי חולים. בשנים האחרונות זיהומים שנרכשו בבית חולים קיבלו תשומת לב הולכת וגוברת בגלל הסיכון הגבוה יותר שלהם. Staphylococcus haemolyticus יכול לגרום עוד יותר לדלקות בעור, לדלקת קרום המוח, דלקת הצפק ואפילו אלח דם. עיכובים באבחון קליני יכולים להוביל להחמרה של מצב הבריאות, ולכן אבחנה מהירה של S. haemolyticus היא המפתח לטיפול מדויק.
צוות המחקר של המורה ג'י טו ממחלקת המעבדה המרכזית בבית החולים העממי השני בליניונגאנג, סין פרסם מאמר "גילוי מהיר ויזואלי של סטפילוקוקוס המוליטיקוס בדגימות קליניות עם מירה-LFS" בכתב העת "אנליטיקה צ'ימיקה אקטה", עם גורם השפעה של 6.2.
1. סקירה כללית של מחקר
במחקר זה הוקמה שיטת MIRA-LFS המבוססת על הגן MVAA לגילוי Staphylococcus haemolyticus. טכנולוגיית ההגברה של חומצת הגרעין המהירה של חומצות גרעין מהירות MIRA משולבת עם רצועת בדיקות זרימה לרוחב, שולבה עם רצועת בדיקות זרימה לרוחב כדי להשיג גילוי מהיר של פתוגן.
הניסוי נערך 37 מעלות, וניתן היה לאתר את התוצאות תוך 9 דקות. הרגישות לגילוי הייתה 0. 147CFU/תגובה.
שיטת גילוי ה- MIRA-LFS מתאימה לגילוי נקודה קבועה של Staphylococcus hemolyticus בדגימות קליניות, ומבין את שיטת ה- POCT לזיהוי Staphylococcus hemolyticus, שהיא בעלת ערך רב לאבחון מהיר של מחלות וטיפול באזורים עם שירותים רפואיים מוגזמים.
צוות המחקר השתמש ב- MIRA-LFS, QPCR ושיטות תרבות חיידקים מסורתית כדי לנתח 95 דגימות קליניות אקראיות ואישר את היישום הקליני.
2. שיטות לחקר
התרשים הסכמטי של גילוי מירה LFS מוצג לעיל.
המחקר השתמש בערכת ההגברה המהירה של ה- DNA של ה- DNA של Biotech של AMP-Futech (סוג רצועת בדיקת זהב קולואיד) ורצועות בדיקת גילוי חומצות גרעין.
אורך פריימר הגן MVAA הוא 30-35 נוקלאוטידים, ואורך המוצר של ההגברה הוא 100-350 bp. בסך הכל תוכננו 6 זוגות של פריימרים של המועמדים. ניתוח MIRA בוצע באמצעות GDNA של זני Staphylococcus hemolyticus סטנדרטיים, פריימרים של המועמדים הוקרנו ומוצרי הגברה הוצגו באמצעות 2% אלקטרופורזה של ג'ל אגרוזה.
ואז תכנן את הבדיקה בהתבסס על רצף הפריימר קדימה (מרחיב 16 BP לאחור). הקצה 5 של הגשושן תויג ב- FITC והקצה 3 'תויג עם חסימת C3. השתמש ב- THF כדי להחליף את 31 הנוקלאוטיד בגשש. THF הוא 30 bp מהקצה 5 ו- 15 bp מהקצה 3 '. הקצה 5 של פריימר ההפוך שנבחר מסומן בביוטין.
יתר על כן, צוות המחקר מיטב את תנאי התגובה לגילוי MIRA-LFS של Staphylococcus hemolyticus. בדוק 37 מעלות במרווחים של 2 דקות מ -4 ל 12 דקות. התוצאות מוצגות בזמן התגובה של 8 דקות ושורת הבדיקה נראית בבירור. בנוסף, בדיקות מתבצעות במרווחים של 5 מעלות מ- 22-52. 37-42 תואר הוא הטמפרטורה המתאימה ביותר לגילוי MIRA-LFS. לפיכך, זמן התגובה והטמפרטורה האופטימליים של שיטת MIRA-LFS עבור Staphylococcus haemolyticus הם 8 דקות ו -37 מעלות, בהתאמה. יחד עם התוצאה הסופית מדמיין על ידי LFS תוך דקה, זמן הגילוי הכולל הוא 9 דקות.
3. תוצאות ניסוי
אימות רגישות
בדיקת MIRA-LFS בוצעה בריכוזים שונים של DNA גנומי (GDNA) שהתקבלו מתרבויות Staphylococcus hemolyticus סדרתיות (1 0^{2}}^0 cfu/ml).
ניתוח רגרסיה של היחידה ההסתברותית הראה כי ה- LOD של 95% שנקבע על ידי בדיקת ה- MIRA-LFS היה 0. 147 CFU/תגובה.
אימות ספציפי
על ידי ניתוח 18 זנים מיקרוביאליים פתוגניים נפוצים ו -15 זני סטפילוקוקוס המוליטיקוס קליניים, נקבע הסלקטיביות של גילוי מירה-LFS של Staphylococcus haemolyticus. התוצאות הראו כי בדיקת ה- MIRA-LFS הייתה שלילית עבור 18 חיידקים פתוגניים אחרים וחיוביים עבור 15 דגימות קליניות מאומתות של Staphylococcus haemolyticus.
איתור MIRA-LFS הוא סלקטיבי ביותר ומתאים להקרנת Staphylococcus hemolyticus.
בדיקת מדגם בפועל
בית החולים Lianyungang של אנשים שני אסף באופן אקראי 95 דגימות, כולל 35 דגימות עור ורקמות רכות, 16 דגימות שתן, 14 דגימות כיח ו -30 דגימות דם.
התוצאות הראו ששיטת הגילוי הייתה 100% תואמת את שיטת QPCR. בנוסף, בהשוואה לתקן הזהב (GB/T4789. 11-2003), הרגישות והספציפיות של שיטת הגילוי של MIRA-LFS לזיהוי זיהום סטפילוקוקוס המוליטיקוס היו 100% ו- 98.73% בהתאמה. תוצאות אלה אימתו עוד יותר את היתכנות הטכנית של שיטה זו באיתור Staphylococcus hemolyticus במדגמים קליניים.
שיטת MIRA-LFS משמשת לגילוי מהיר של POCT של Staphylococcus hemolyticus. זה יעיל, מדויק, פשוט ועלות נמוכה, ומסייע בקבלת החלטות אבחון וטיפול מהירות.
ללמוד על טכנולוגיית מירה
רב-אנזים של AMP-FUTURE טכנולוגיית חומצה גרעין מהירה של חומצה גרעינית מגבירה חומצות גרעין בטמפרטורה קבועה של 39 מעלות {}}}, עם זמן תגובה של {4}} דקות בלבד. בנוסף, אין צורך בתנאי מעבדה קפדניים, ותרחישי היישום מגוונים: מחלקות מעבדה כלליות של בית חולים, טיפול ראשוני, בדיקות ביתיות, שדות וכו '.
צורות המוצר המגיבות הן מגוונות: אבקה מיובשת הקפאה, מיקרוספרות מיובשות הקפאה וכו '; תוצאות התצוגה הן מגוונות: אלקטרופורזה ג'ל, עקומת פלואורסצנט, רצועות בדיקת זהב קולואידליות וכו '. המגיב בעל ביצועים יציבים, קל לתפעול ונוח לאחסון ולהובלה.
עם MIRA כטכנולוגיית פלטפורמת הליבה, היא פיתחה סדרה של מוצרים תומכים כמו "טכנולוגיית שחרור חומצות גרעין מהירה במיוחד", "גלאי פלואורסצנטיות איזותרמית כפולה-ערוץ", "משולבת מערכת איתור סגורה אוטומטית לחלוטין", "מכשיר לגילוי חומצה גרעינית של בדיקה עצמית", וכו 'יוצרים תמיסה כוללת לגילוי מולקולרי מהיר.